產(chǎn)品貨號：AV1501-B

產(chǎn)品名稱：人尿源間充質干細胞擴增培養(yǎng)試劑盒

Human urine-derived mesenchymal stem cell expansion kit

人尿源間充質干細胞擴增培養(yǎng)試劑盒產(chǎn)品描述

該試劑盒為經(jīng)過優(yōu)化的低血清(2%V/V )尿源間充質干細胞( Urine-derived mesenchymal stem cell,USC)體外擴增培養(yǎng)基。低血清降低了胎牛血清對尿源干細胞特性和分化的不利影響,穩(wěn)定性更加，適用于實驗室科研。生長因子、激素的聯(lián)合應用維持了干細胞特性及旺盛的細胞增殖能力，配合人尿源間充質干細胞分離試劑盒可在短時間內收獲大量細胞。

產(chǎn)品內容

使用說明

人尿源間充質干細胞擴增*培養(yǎng)基的配制:

將擴增培養(yǎng)基添加劑置于2- -8C環(huán)境中過夜解凍直至*溶解，混合均勻，與擴增基礎培養(yǎng)基混合配置為500mL人尿源間充質干細胞擴增*培養(yǎng)基

注意事項:

●配好后避光2- -8C保存，4周內使用完畢

●所有產(chǎn)品請于保質期內使用，超過保質期，必須放棄使用

●為確保產(chǎn)品質量，請避免反復凍融相關產(chǎn)品

1、人尿源間充質干細胞(USC)擴增與傳代:

1)細胞隔天換液，待鏡下細胞融合率達80%~90%，即可消化傳代

2)室溫0.25% EDTA-胰酶消化USC (一般不超過1min)，鏡下觀察，待細胞邊緣透亮、變圓時，加入適量USC擴增培養(yǎng)基終止消化，吹打混勻，重懸細胞

3) 1200rpm, 4min離心

4)棄上清, USC擴增培養(yǎng)基重懸細胞，按1:4比例接種至培養(yǎng)皿，進行后續(xù)培養(yǎng)

注意事項:

●USC細胞生長速率較快，待細胞融合率達80~90%或內部生長空間較小時即可進行消化傳代，因干細胞接觸抑制易影響其增殖活力。

●本培養(yǎng)基可體外擴增USC至10代左右，代數(shù)增加會加速細胞老化，細胞實驗盡量在P7代前進行,分化實驗盡量取代數(shù)較早細胞(P3代左右)進行。

2、USC凍存

1)配制凍存液: DMSO:血清= 200u: 800ul

2) 0.25% EDTA-胰酶消化USC 1分鐘左右，加入3- 5ml USC擴增培養(yǎng)基終止消化，吹打混勻細胞懸液

3) 1200rpm, 4min離心

4)棄上清,加500ul USC擴增培養(yǎng)基重懸

5)將1ml凍存液逐滴緩慢加入細胞懸液，混勻后轉移進冷凍管中，總體系1.5mL

6)標記名稱、代數(shù)、日期，封好封口膜，放入梯度凍存盒

7)將凍存盒放入-809C, 24小時后(第二天)轉入液氮保存

注意事項:

●慢凍速溶，凍存細胞緩慢梯度降溫，可配合使用梯度凍存盒，-809C凍存后盡早轉入液氮保存

3、USC復蘇

1) 379C水浴鍋打開備用

2)從液氮取出細胞，放入水浴鍋速溶，時間控制在1分半鐘內

3)將凍存管內液體緩慢加入5ml USC擴增培養(yǎng)基內,吹打混勻

4) 1200rpm, 4min離心

5)棄上清,加入適量USC擴增培養(yǎng)基，接種至培養(yǎng)皿

6)復蘇24小時后(第二天)全換液

注意事項:

●慢凍速溶，復蘇細胞水浴時間盡量控制在一-分半鐘，可晃動加速溶解

●復蘇后第二天(細胞貼壁后)盡早全換液，減少DMSO對細胞的毒性損傷

●為保證細胞活力，請避免反復凍融細胞

本尿源間充質干細胞擴增培養(yǎng)基已經(jīng)過人尿源間充質干細胞性能測試，詳見附圖(3, 4, 5)

質量控制

√無菌檢測(細菌、真菌和支原體檢測)

√pH測試

√滲透壓檢測

√內毒素檢測

附圖3人尿源間充質干細胞體外擴增傳代圖片(光鏡: 100X )

附圖4人尿源間充質干細胞表面標記物鑒定

CD29、CD73、CD90、CD44等間充質干細胞(MSC)特異性表面標記物強陽性表達，SSEA-4多潛能干性標記物強陽性表達，造血干細胞、內皮細胞來源的標記物CD45、CD34、CD31、HLA-DR等均陰性，鑒定其為MSC來源

附圖5人尿源間充質干細胞體外定向誘導后向脂肪、成骨、軟骨細胞分化

成骨: ALP+;茜素紅+; RUNX2、OCN+

成脂:脂滴+;油紅O+

成軟骨:甲苯胺藍+; SOX9、COL II+

References

1.Zhang,Y.,et a1.(2008). Urine Derived Cells are a Potential Source for Urological Tissue Reconstruction. J urol

180(5):2226- -33.

2. Zhou,T,et al.(2012).Generation of human induced pluripotent stem cells from urine samples. Nat Portoc

7(12):2080-9.

3.Bharadwaj,S. ,et al (2013).Multipotential differentiation of human urine- -derived stem cells: potential for

therapeutic applications in urology.Stem Cells 31(9):1840-56.

4.Ji,X,et al.(2017).Urine-Derived Stem Cells: The Present and the Future.Stem Cells Int 2017:4378947.

5.Falzarano,M.S.,et al.(2019).Urinary Stem Cells as Tools to Study Genetic Discase: Overview of the Literature.J

Clin Med 8(5). pil: E627.

6.Wang,L.,et al.(2013).Generation of integration- -free neural progenitor cells from cells in human urine.Nat

Methods 10(1):84- -9.

07